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            樣品制備技術不過硬 電鏡儀器再好也沒用

            2015/6/4 12:03:11點擊:

            2015年5月29日-6月2日,“2015全國生物醫學農林電鏡技術研討會暨生物電鏡前沿技術培訓班”在浙江大學舉行。本次會議特別邀請了國內外知名專家教授和電鏡工作者講授生物電子顯微鏡技術的最新發展,交流生物樣品制備和應用方面的技術經驗,并安排部分學員參加實驗操作及演示。

            第二軍醫大學楊勇驥教授在研討會上做了題為“常規生物電鏡樣品制備”的報告,介紹了自己對于常規電鏡制樣技術的理解及應用心得。

            楊勇驥表示:“電鏡技術是目前形態學分析的最高層次,電鏡的最終目標就是獲得完美的照片,F今社會科研競爭十分激烈,生物電鏡技術是理工醫綜合性最強、精細程度最高的應用技術之一,是能夠真正體驗到‘細節’決定成敗的一種特殊的技術方法。而生物電鏡又是一個不出活的技術,因此必須要在電鏡工作中刻苦鉆研,才能有所成就!

            楊勇驥強調說,要想得到完美的電鏡照片,必須要有過硬的生物電鏡樣品制備技術,否則哪怕是采用最高精尖的電鏡也得不到理想的結果。報告中楊勇驥比較了自己實驗室里一臺使用了30年的電鏡和2009年采購的新型電鏡對同樣的樣品的觀察結果,結果發現使用了30年的電鏡由于制樣好,觀察結果反而更好。

            生物樣品常規電鏡制樣包括:樣品取材、固定、脫水、浸透、包埋、修快、定位、超薄切片、電子染色等步驟。楊勇驥指出這么多環節,任何一個環節出現一點問題,整個制樣就失敗了。報告中他詳細的介紹了各個環節應該注意的要點,以及易犯的錯誤。

            從楊勇驥的介紹中,我們體會到了生物電鏡制樣的要求是多么精細。就單拿超薄切片這一個步驟來說,要想獲得理想的切片效果,首先在切片時一定要有良好的心境,甚至要在自己心情比較好的時候才能來做這項工作。另外切片時要確保沒有人打擾,還要避免對切片機大聲咳嗽、打噴嚏等。切片的環境不能過于潮濕,否則會引起震顫。要選擇合適的切片速度。撈片時要選擇潔凈的、未氧化的、親水性良好的載網才能撈起完整的切片,所用載網如果放了幾天,已經被氧化,就不要用來撈片了,同時注意用載網的正面撈片。另外,還有確保玻璃刀或鉆石刀的刀口平整。

            最終理想的超薄切片應該是厚薄均一、無空洞、無震顫、無皺褶、無雜質污染的連續切片,而且除了切片這個環節,前期的取材、脫水、浸透、包埋、修快、定位與后期的染色等對切片效果的影響是環環相扣。

            最后,楊勇驥說道:“生物電鏡制樣技術是生物醫學技術中最精細、最繁復的技術之一。生物電鏡工作者沒有教授與技術員之分,只有不斷實踐摸索技術,精心總結經驗,才能掌握這門技術的精髓,才能配合使用電鏡獲得理想精美的超微結構圖像!